酵母表达纯化服务

系统优势

• 无自产内毒素；
• 产物可翻译后修饰：糖基化、磷酸化、酰酯化等，蛋白具有生物活性的可能性更高；
• 产物可正确折叠和高效分泌；
• 性质较原核表达的蛋白质更加稳定，特别适合于表达和制备具有功能的蛋白：如结核类蛋白、防御素类蛋白、白介素蛋白及细胞因子等。

服务优势

• 无风险定制，不成功不收费；
• 特有的PickRight技术，转化后免筛选直接可获得高表达量菌株，相比传统筛选节省5-10个工作日；
• 高产量：摇瓶培养条件下高达100mg/L；
• 高性价比：价格低至5200元起；
• 货期短：最短35工作日即可交付。

我们承诺

注：该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质，我们将按步骤收费。

特色表达体系

● pPic9k-JT质粒+GS115菌株高效表达

载体特色

• 携带有AOX1强启动子，含有alpha分泌因子可高效分泌表达；
• 无缝克隆连接不惧任何内切酶位点；
• 多个线性化位点：SalⅠ，SacⅠ，BglⅡ；
• 原核阶段可进行Amp和Kan双抗性筛选阳性菌株；
• 真核阶段可进行His+和G418筛选高表达菌株；
• 改造过的多克隆位点，克隆不受目的基因中潜在的核酸内切酶位点限制；
• 载体自带his 标签，方便克隆与纯化。

● pPic9k-SUMOSTAR质粒+GS115菌株高效表达

载体特色

• 携带有AOX1强启动子，含有alpha分泌因子可高效分泌表达；
• 含有SUMOSTAR融合蛋白，具有很强促表达能力；
• 无缝克隆连接不惧任何内切酶位点；
• 含有EK酶切位点，酶切可得到无标签蛋白；
• 多个线性化位点：SalⅠ，SacⅠ；
• 原核阶段可进行Amp和Kan双抗性筛选阳性菌株；
• 真核阶段可进行His+和G418筛选高表达菌株；
• 改造过的多克隆位点，克隆不受目的基因中潜在的核酸内切酶位点限制；
• 载体自带his 标签，方便克隆与纯化。

案例展示

案例1: 酵母表达系统表达高纯度蛋白

难点：酵母胞内表达，破菌后纯化，可以看出裂解液中杂蛋白非常多（泳道1），目的蛋白非常不明显，经过酵母系统特有的层析系统一次纯化，用SDS-PAGE检测看不到杂带，纯度达到95%以上（泳道6-7）。

泳道1：裂解液
泳道2：上样穿透液
泳道3：Marker
泳道4-7：不同梯度洗脱下来的目的蛋白

泳道1：裂解液
泳道2：上样穿透液
泳道3：Marker
泳道4-7：不同梯度洗脱下来的目的蛋白

特点：酵母分泌表达，蛋白表达后直接分泌到培养基中，基本无杂蛋白，本身纯度就高达90%以上，通过纯化主要是去除色素及培养基中其他残留物质，只留下在适宜缓冲中的目的蛋白。

泳道1：发酵液上清
泳道2：Marker
泳道3：上样穿透液
泳道4：洗脱下来的目的蛋白

 

案例2: 酵母表达系统表达大分子量蛋白

难点：700氨基酸以上，81kDa，为了得到较高纯度，选择分泌载体进行表达，成功表达并分泌出来。

N-terminal GST-tagged

泳道1：发酵液上清
泳道2：上样穿透液
泳道3：洗脱下来的目的蛋白
泳道4：Marker

 

案例3: 酵母表达系统表达小分子蛋白

难点：46氨基酸，7kDa，分子量非常小，相对来说不太容易检测及浓缩，从SDS-PAGE检测图来看表达、纯化、收集都非常成功。

泳道1：发酵液上清
泳道2：洗脱下来的目的蛋白
泳道3：Marker

难点：36氨基酸以上，4kDa，分子量非常小，而且这个客户要求切除标签，在分子量本身就很小的情况下切除标签是非常有难度的，但我们经过一系列处理后成功将标签切除，且WB用标签抗体检测目的蛋白中不含蛋白标签，最终得到了高纯度、小分子量的无标签蛋白。

案例4：酵母表达系统表达N-型糖基化修饰蛋白

特点：接近天然蛋白的修饰，尤其是糖基化修饰在酵母表达系统特别明显，用SDS-PAGE检测呈弥散状条带且偏大，经过去N-型糖基化修饰的Endo H酶消化，带型变实且大小与理论值吻合。

泳道1：纯化后的目的蛋白（N-型糖基化修饰）
泳道2：经Endo H去糖基化修饰后的蛋白
泳道3：Marker