外泌体的提取实验方案
日期:2024-07-02 15:19:22
外泌体是一类含有脂质双层结构的小泡状体,包裹着细胞分泌的蛋白质、核酸和脂质等成分,具有重要的细胞间通讯和信号传递功能。提取外泌体是研究其生物学功能和临床应用的关键步骤。

以下是一种常用的外泌体提取实验方案:
材料准备:
细胞培养基(含有血清的培养基)
离心管
超声破碎仪
超速离心机
过滤器(0.22μm)
Buffer A(10mM Tris-HCl, pH 7.4)
Buffer B(无血清的培养基)
步骤:
将培养基中的外泌体产生的细胞培养在含有血清的培养基中,当细胞生长到80-90%后更换Buffer A培养基。
收集培养基,使用低速离心(3000g,10分钟)去除细胞碎片。
用超声波破碎仪在冰上将上述液体进行超声波破碎。
使用超速离心机在4℃下离心10分钟,去除细胞碎片和大颗粒物。
取上清液,使用0.22μm的过滤器过滤。
将过滤后的上清液再次使用超速离心机在4℃下离心30分钟,收集上清液。
外泌体的沉淀物进行Buffer B缓冲液冲洗后,再次使用超速离心机在4℃下离心30分钟。
收集上清液即提取到的外泌体。
在实验中要尽量避免外泌体的污染和损坏,同时要根据具体细胞类型和实验目的进行条件的优化和调整。
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