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外泌体的提取实验方案

日期:2024-07-02 15:19:22

    外泌体是一类含有脂质双层结构的小泡状体,包裹着细胞分泌的蛋白质、核酸和脂质等成分,具有重要的细胞间通讯和信号传递功能。提取外泌体是研究其生物学功能和临床应用的关键步骤。
 
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以下是一种常用的外泌体提取实验方案:
 
材料准备:
 
    细胞培养基(含有血清的培养基)
    离心管
    超声破碎仪
    超速离心机
    过滤器(0.22μm)
    Buffer A(10mM Tris-HCl, pH 7.4)
    Buffer B(无血清的培养基)
 
步骤:
 
    将培养基中的外泌体产生的细胞培养在含有血清的培养基中,当细胞生长到80-90%后更换Buffer A培养基。
    收集培养基,使用低速离心(3000g,10分钟)去除细胞碎片。
    用超声波破碎仪在冰上将上述液体进行超声波破碎。
    使用超速离心机在4℃下离心10分钟,去除细胞碎片和大颗粒物。
    取上清液,使用0.22μm的过滤器过滤。
    将过滤后的上清液再次使用超速离心机在4℃下离心30分钟,收集上清液。
    外泌体的沉淀物进行Buffer B缓冲液冲洗后,再次使用超速离心机在4℃下离心30分钟。
    收集上清液即提取到的外泌体。
 
    在实验中要尽量避免外泌体的污染和损坏,同时要根据具体细胞类型和实验目的进行条件的优化和调整。

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