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稳转细胞株构建服务的流程

日期:2024-04-01 13:40:04

1. 项目咨询
 
    与服务提供商讨论您的项目目标、所需细胞类型和表达要求。
    提供目标基因、启动子和其他相关信息。
 
2. 构建体设计和构建
 
    服务提供商将设计和构建含有目标基因、启动子和选择标记的质粒。
    质粒可以通过各种方法构建,如酶切连接、吉布森组装或金门组装。
 
3. 细胞培养和转染
 
    服务提供商将使用适当的细胞培养基和转染方法将质粒转染到目标细胞中。
    常见的转染方法包括脂质体转染、电穿孔和病毒转染。
 
4. 稳定转染体筛选
 
    转染后的细胞将在含有选择剂的培养基中培养,以选择稳定整合质粒的细胞。
    选择剂可以是抗生素、荧光蛋白或其他标记。
 
5. 克隆筛选和扩增
 
    稳定转染的细胞将被克隆到单个培养皿中,以获得单克隆细胞株。
    单克隆细胞株将被扩增并进行进一步分析。
 
6. 表达分析和验证
 
    服务提供商将通过免疫印迹、荧光分析或其他方法分析目标蛋白的表达水平。
    他们还可以进行功能分析,以评估蛋白质的活性或功能。
 
7. 细胞株交付
 
    一旦建立并验证了稳转细胞株,服务提供商将向您交付细胞株。
    细胞株通常以冷冻形式或活细胞形式交付。
 
其他注意事项
 
    服务提供商可能提供额外的服务,如质粒构建、细胞培养优化和数据分析。
    项目时间表和成本将根据项目的复杂性和要求而有所不同。
    在选择服务提供商之前,请务必调查他们的经验、专业知识和客户评价。
 

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