抗体定制服务包括哪些内容？

日期：2024-11-18 13:11:15

抗体定制服务是一个较为复杂的领域，主要包括以下几个方面的内容：

抗体类型定制有哪些？

1、单克隆抗体定制

抗原制备：首先需要客户提供目标抗原或者服务方帮助客户制备抗原。例如，如果目标是一种新型病毒蛋白，就需要通过基因工程表达系统（如大肠杆菌、哺乳动物细胞等）来生产足够量的、具有免疫原性的抗原蛋白。

动物免疫：将抗原注射到合适的动物体内，最常用的是小鼠。根据抗原的性质和实验要求，设计合理的免疫方案，包括免疫剂量、免疫途径（如皮下注射、腹腔注射等）和免疫时间间隔等。例如，对于一些小分子抗原，可能需要与载体蛋白偶联后再进行免疫，并且需要多次加强免疫来刺激免疫系统产生足够的、针对目标抗原的 B 淋巴细胞。

细胞融合与筛选：在动物体内产生足够的免疫反应后，取出脾脏细胞（其中含有产生抗体的 B 淋巴细胞）与骨髓瘤细胞进行融合。通过特殊的筛选培养基（如 HAT 培养基），筛选出融合成功的杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞既具有 B 淋巴细胞产生特异性抗体的能力，又具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性。

单克隆抗体的生产与纯化：筛选出能稳定分泌目标抗体的杂交瘤细胞株后，进行大规模培养。可以采用体外培养方式，如在细胞培养瓶或者生物反应器中培养；也可以将细胞接种到动物体内（如小鼠腹腔），让其产生腹水来获得大量抗体。最后，通过蛋白纯化技术（如亲和层析、离子交换层析等）得到高纯度的单克隆抗体。

2、多克隆抗体定制

抗原准备工作同单克隆抗体：抗原的质量和特性同样会影响多克隆抗体的质量。例如，对于复杂的抗原（如全细胞、组织提取物等），其成分的多样性会导致动物产生针对多种抗原表位的抗体。

动物免疫策略调整：免疫动物的选择范围更广，除小鼠外，还可以是兔子、山羊等。免疫剂量和时间间隔根据动物种类和抗原性质有所不同。一般来说，多克隆抗体的免疫周期可能相对较短，但需要考虑不同动物的免疫反应差异。

血清收集与抗体纯化：在免疫过程结束后，收集动物血清。血清中含有多种抗体，是多克隆抗体的粗提物。可以通过盐析、亲和层析等方法对血清中的抗体进行纯化，以满足不同的实验需求。例如，对于一些对抗体纯度要求较高的实验（如免疫组化），可能需要采用多种纯化方法相结合，以去除血清中的杂质蛋白和其他无关成分。

3、抗体标记定制

荧光标记抗体定制：根据客户的实验需求，如细胞成像、流式细胞术等，选择合适的荧光染料（如 FITC、PE、Cy3、Cy5 等）对抗体进行标记。标记过程需要精确控制反应条件，包括染料与抗体的比例、反应时间、温度和 pH 值等，以确保标记效率和抗体活性。例如，在进行流式细胞术检测细胞表面抗原时，需要使用荧光标记抗体，标记后的抗体能够特异性地结合到细胞表面的目标抗原上，通过流式细胞仪检测荧光信号，从而实现对细胞亚群的分析。

酶标记抗体定制：对于免疫检测实验（如 ELISA、免疫组化等），常用酶标记抗体来进行信号放大和检测。常见的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。标记过程涉及到化学交联方法，将酶分子与抗体分子共价结合，同时要避免影响抗体的抗原结合活性和酶的催化活性。例如，在 ELISA 实验中，酶标记抗体与抗原 - 固定抗体复合物结合后，加入相应的酶底物，通过酶催化底物产生颜色变化来定量检测抗原。

放射性同位素标记抗体定制：在一些特殊的医学诊断和研究（如肿瘤的放射性免疫显像）中，需要使用放射性同位素标记抗体。标记过程需要特殊的设备和技术人员操作，确保标记的准确性和安全性。例如，碘 - 131 标记的抗体可以用于甲状腺癌的诊断和治疗，利用抗体对甲状腺癌细胞表面抗原的特异性结合，将放射性物质带到肿瘤部位，实现对肿瘤的定位和治疗。

4、抗体片段定制

Fab 片段定制：通过酶切完整抗体（如木瓜蛋白酶），可以获得抗原结合片段（Fab）。定制过程包括选择合适的酶切条件，以确保高效产生 Fab 片段，并且要通过纯化步骤去除酶和其他杂质。Fab 片段具有完整抗体的抗原结合活性，但分子量较小，在一些组织穿透性要求高的实验（如体内肿瘤成像）中有优势。

F (ab')₂片段定制：用胃蛋白酶酶切抗体可得到 F (ab')₂片段，它含有两个抗原结合位点，相对 Fab 片段在抗原结合上可能具有更强的亲和力。在定制过程中同样要关注酶切条件和后续纯化，并且这种片段在某些免疫检测中能够减少非特异性结合，提高检测的特异性。

5、抗体亲和力成熟定制

定点突变技术：通过对抗体基因进行定点突变，改变抗体可变区的氨基酸序列，然后筛选出亲和力提高的突变体。例如，根据抗体与抗原结合的晶体结构信息，确定可能影响亲和力的关键氨基酸残基，对其进行突变，构建突变体库，再利用噬菌体展示、酵母展示等技术筛选高亲和力突变体。

链替换技术：将抗体的轻链或重链进行替换，构建新的抗体组合，从中筛选出亲和力增强的抗体。这一过程涉及到基因工程操作和高通量筛选方法，以快速筛选出具有理想亲和力的抗体。例如，在噬菌体展示技术平台上，将不同来源的轻链基因与固定的重链基因组合，构建轻链替换文库，通过抗原筛选得到亲和力更高的抗体。