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抗体定制服务包括哪些内容?

日期:2024-11-18 13:11:15

    抗体定制服务是一个较为复杂的领域,主要包括以下几个方面的内容:

抗体类型定制有哪些?
 
1、单克隆抗体定制
    抗原制备:首先需要客户提供目标抗原或者服务方帮助客户制备抗原。例如,如果目标是一种新型病毒蛋白,就需要通过基因工程表达系统(如大肠杆菌、哺乳动物细胞等)来生产足够量的、具有免疫原性的抗原蛋白。
 
    动物免疫:将抗原注射到合适的动物体内,最常用的是小鼠。根据抗原的性质和实验要求,设计合理的免疫方案,包括免疫剂量、免疫途径(如皮下注射、腹腔注射等)和免疫时间间隔等。例如,对于一些小分子抗原,可能需要与载体蛋白偶联后再进行免疫,并且需要多次加强免疫来刺激免疫系统产生足够的、针对目标抗原的 B 淋巴细胞。
 
    细胞融合与筛选:在动物体内产生足够的免疫反应后,取出脾脏细胞(其中含有产生抗体的 B 淋巴细胞)与骨髓瘤细胞进行融合。通过特殊的筛选培养基(如 HAT 培养基),筛选出融合成功的杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞既具有 B 淋巴细胞产生特异性抗体的能力,又具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性。
 
    单克隆抗体的生产与纯化:筛选出能稳定分泌目标抗体的杂交瘤细胞株后,进行大规模培养。可以采用体外培养方式,如在细胞培养瓶或者生物反应器中培养;也可以将细胞接种到动物体内(如小鼠腹腔),让其产生腹水来获得大量抗体。最后,通过蛋白纯化技术(如亲和层析、离子交换层析等)得到高纯度的单克隆抗体。

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2、多克隆抗体定制
    抗原准备工作同单克隆抗体:抗原的质量和特性同样会影响多克隆抗体的质量。例如,对于复杂的抗原(如全细胞、组织提取物等),其成分的多样性会导致动物产生针对多种抗原表位的抗体。
 
    动物免疫策略调整:免疫动物的选择范围更广,除小鼠外,还可以是兔子、山羊等。免疫剂量和时间间隔根据动物种类和抗原性质有所不同。一般来说,多克隆抗体的免疫周期可能相对较短,但需要考虑不同动物的免疫反应差异。
 
    血清收集与抗体纯化:在免疫过程结束后,收集动物血清。血清中含有多种抗体,是多克隆抗体的粗提物。可以通过盐析、亲和层析等方法对血清中的抗体进行纯化,以满足不同的实验需求。例如,对于一些对抗体纯度要求较高的实验(如免疫组化),可能需要采用多种纯化方法相结合,以去除血清中的杂质蛋白和其他无关成分。
 
3、抗体标记定制
    荧光标记抗体定制:根据客户的实验需求,如细胞成像、流式细胞术等,选择合适的荧光染料(如 FITC、PE、Cy3、Cy5 等)对抗体进行标记。标记过程需要精确控制反应条件,包括染料与抗体的比例、反应时间、温度和 pH 值等,以确保标记效率和抗体活性。例如,在进行流式细胞术检测细胞表面抗原时,需要使用荧光标记抗体,标记后的抗体能够特异性地结合到细胞表面的目标抗原上,通过流式细胞仪检测荧光信号,从而实现对细胞亚群的分析。
 
    酶标记抗体定制:对于免疫检测实验(如 ELISA、免疫组化等),常用酶标记抗体来进行信号放大和检测。常见的标记酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。标记过程涉及到化学交联方法,将酶分子与抗体分子共价结合,同时要避免影响抗体的抗原结合活性和酶的催化活性。例如,在 ELISA 实验中,酶标记抗体与抗原 - 固定抗体复合物结合后,加入相应的酶底物,通过酶催化底物产生颜色变化来定量检测抗原。
 
    放射性同位素标记抗体定制:在一些特殊的医学诊断和研究(如肿瘤的放射性免疫显像)中,需要使用放射性同位素标记抗体。标记过程需要特殊的设备和技术人员操作,确保标记的准确性和安全性。例如,碘 - 131 标记的抗体可以用于甲状腺癌的诊断和治疗,利用抗体对甲状腺癌细胞表面抗原的特异性结合,将放射性物质带到肿瘤部位,实现对肿瘤的定位和治疗。
 
4、抗体片段定制
    Fab 片段定制:通过酶切完整抗体(如木瓜蛋白酶),可以获得抗原结合片段(Fab)。定制过程包括选择合适的酶切条件,以确保高效产生 Fab 片段,并且要通过纯化步骤去除酶和其他杂质。Fab 片段具有完整抗体的抗原结合活性,但分子量较小,在一些组织穿透性要求高的实验(如体内肿瘤成像)中有优势。
 
    F (ab')₂片段定制:用胃蛋白酶酶切抗体可得到 F (ab')₂片段,它含有两个抗原结合位点,相对 Fab 片段在抗原结合上可能具有更强的亲和力。在定制过程中同样要关注酶切条件和后续纯化,并且这种片段在某些免疫检测中能够减少非特异性结合,提高检测的特异性。
 
5、抗体亲和力成熟定制
    定点突变技术:通过对抗体基因进行定点突变,改变抗体可变区的氨基酸序列,然后筛选出亲和力提高的突变体。例如,根据抗体与抗原结合的晶体结构信息,确定可能影响亲和力的关键氨基酸残基,对其进行突变,构建突变体库,再利用噬菌体展示、酵母展示等技术筛选高亲和力突变体。
 
    链替换技术:将抗体的轻链或重链进行替换,构建新的抗体组合,从中筛选出亲和力增强的抗体。这一过程涉及到基因工程操作和高通量筛选方法,以快速筛选出具有理想亲和力的抗体。例如,在噬菌体展示技术平台上,将不同来源的轻链基因与固定的重链基因组合,构建轻链替换文库,通过抗原筛选得到亲和力更高的抗体。