酵母表达纯化服务

酵母蛋白表达系统是一种最经济高效的真核蛋白表达系统,可以成功实现胞内表达或是分泌表达,且酵母表达系统放大培养基相对廉价,培养条件要求不高,适宜工业放大。

哺乳动物细胞表达系统能够表达出接近天然蛋白的高质量蛋白,但是表达量低,培养基成本过高及培养条件相对苛刻,限制了哺乳动物细胞表达系统用于制备高质量蛋白原料的推广应用。酵母蛋白表达系统和哺乳动物细胞表达系统一样,作为真核表达系统能很好整合哺乳动物细胞表达系统的优点。能够对所表达蛋白进行例如糖基化、酰基化、脂基化、磷酸基化等保证蛋白天然构象的修饰。用于制备非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料,事实证明我们的酵母蛋白表达系统服务经客户回馈所制备的蛋白原料经下游制备的单抗均具有很好的识别天然蛋白的优良特性。

我们高效的种子筛选工作能使您的订单在最短的时间内获得尽可能的高产。

华美生物酵母表达系统由多年从事酵母表达操作的实验人员组成,在酵母表达平台有很多成功的案例,我们采用自行改造的高效分泌载体:Ppic9k、Ppic9k高效融合载体、PPICZa、PGAPZa、PPaSUMO3,宿主:GS115、KM71、X33的正交组合。另外我们采用PINK系统优化分泌表达信号肽。胞内表达我们采用自行改造的载体Ppic3.5k载体和宿主GS115、KM71、X33的组合,在最大程度上实现表达。

服务优势

服务项目 特点优势
表达载体构建

经过改造的表达载体,缩短了筛选周期的同时,大幅提高了高表达菌株获得几率;

可增加His标签融合表达,方便鉴定与纯化,一步亲和层析纯度即可达95%以上;

可提供详细表达纯化条件,实验数据以及菌株。

高表达菌株筛选
表达条件优化
表达并制备蛋白

服务类型

酵母蛋白表达服务经济型套餐

实验项目 实验流程 交付内容 时间
原核克隆 基因的获得 核酸电泳图片 2周
PCR扩增产物酶切连接到本公司改造过的Ppic9k载体
转化DH5α
重组质粒大量制备
线性化重组质粒
2.优化表达 电转化适宜的酵母宿主 酵母菌落核酸电泳图 2-3周
从转化的平板上随机挑10株单菌落做PCR鉴定
3.表达及纯化 从PCR鉴定阳性菌落中选取一株做1L体系的放大表达 最终种子表达上清SDS-PAGE图 1-2周
发酵液上清处理及一步纯化 最终纯化产物SDS-PAGE 及western blot
纯化产物SDS-PAGE及western blot 1L上清的纯化产

以下是我们通过华美自行改造的Ppic9k载体和GS115宿主系统成功表达一种酶的经济型套餐实例。我们自接到订单至成功表达只用了20个工作日,亲和层析一步纯化得到蛋白纯度在95%以上。

酵母蛋白表达服务标准型套餐

实验项目 实验流程 交付内容 时间
原核克隆 基因的获得 核酸电泳图片 2周
PCR扩增产物酶切连接到本公司改造过的Ppic9k载体
转化DH5α
重组质粒大量制备
线性化重组质粒
优化表达 电转化适宜的酵母宿主 酵母菌落核酸电泳图 5-6周
用遗传霉素G418进行多拷贝子筛选
对多拷贝子克隆进行PCR鉴定
选取40株多拷贝子进行小量诱导表达 最终种子表达上清SDS-PAGE图
表达及纯化 选取表达情况最好的,根据客户需要放大表达 表达上清SDS-PAGE 1-2周
发酵液上清处理及一步纯化 最终纯化产物SDS-PAGE及western blot
纯化产物SDS-PAGE及western blot 客户要求的蛋白表达量

以下是一个客户需要做优化表达的标准型订单服务,客户要求表达一种药用蛋白,最后做工艺放大,对表达量有一定的要求,客户自己做了大量的工作但是表达量一直提不上去,我们从上游开始做表达优化,用了50个工作日,用华美自己改造的Ppic9k载体和KM71H宿主在2.5mg/ml的G418浓度下获得一株令客户满意的工艺放大种子。

联系信息

邮箱:tech@cusabio.com

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