蛋白质控

华美生物所有蛋白产品都会经过严格的质量控制,包括蛋白质的浓度测定、纯度测定、分子量检测、内毒素检测、蛋白质活性检等。蛋白质质量控制的流程图如下:

1. 蛋白浓度测定

蛋白质浓度检测的方法有bradford法、BCA法、A280法,根据缓冲成本选择合的检测方法,其中最常用的为bradford法,浓度检测的范围为1-5mg/ml。Bradford法标准曲线如下图所示:

2. 蛋白分子量检测

蛋白质分子量检测采用考马斯亮蓝显色结合SDS-PAGE检测,分子质量跟氨基酸序列推测的理论分子质量一致。重组小鼠 Calreticulin(Calr)蛋白理论分子质量为73.3KD,其检测结果如下:

3. 蛋白质纯度检测

蛋白质纯度检测采用考马斯亮蓝显色SDS-PAGE分离蛋白,通过bandscan软件分析蛋白质的纯度,蛋白质的纯度需达到90%。

4. 蛋白内毒素检测

内毒素检测采用 LAL方法,内毒素含量低于1 EU / μg。

5. 蛋白质活性检测

蛋白质活性检测有ELISA方法,细胞活性检测,酶活性检测方法三种方法,其中受体蛋白主要采用ELISA方法,细胞因子类蛋白采用细胞活性检测法,酶类采用活性检测方法。

Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized ACKR1 at 1 μg/ml can bind human CCL2, the EC50 of human CCL2 protein is 48.64-60.24 μg/ml.

Measured in a cytotoxicity assay using L 929 mouse fibroblast cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The ED50 for this effect is 33.32-47.38 pg/ml

6. 测序

蛋白质质谱鉴定是蛋白质组学研究的核心技术之一,是鉴定蛋白质的主要方法。质谱分析可分为两类:MALDI-TOF和LC-MS / MS,其中,LC-MS / MS具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性,这是文献中最常用的方法。目前,从蛋白质样品混合物中鉴定单一蛋白是蛋白质研究中的一个核心问题。分离蛋白质混合物有两种常用方法:二维凝胶电泳(2-DE)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)。

现今,华美生物的蛋白质凝胶条和凝胶点鉴定已经形成了一套成熟的流程,主要包括通过一维或二维电泳获得目标蛋白条带和斑点,并连续优化凝胶内酶解方法,然后通过LC-MS / MS分析获得蛋白质碎裂芯片电荷,峰图和其他相关信息。该方法可以显着提高质谱鉴定的成功率和蛋白质凝胶消化中肽的覆盖率。